PCR是利用一段DNA為模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下,將該段DNA擴增至足夠數(shù)量,以便進行結(jié)構(gòu)和功能分析。PCR醫(yī)學檢測方法在臨床上快速診斷細菌性傳染病等方面具有極為重要的意義。
PCR原理用于擴增位于兩段已知序列之間的DNA片段,類似于天然DNA的復制過程。以擬擴增的DNA分子為模板,以一對分別與模板5’末端和3’末端互補的寡核苷酸片段為引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留復制的機制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成,重復這一過程,即可使目的DNA片段得到擴增。
PCR醫(yī)學檢測先根據(jù)試劑盒說明書樣本要求,進行標本采集,常規(guī)的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。獲得患者樣本后需盡快進行檢測,如無法立即檢測需要轉(zhuǎn)運的樣本,應(yīng)按照說明書的要求進行低溫封存,并送到專門的檢測機構(gòu)進行檢測。檢測機構(gòu)收到樣本后會對樣本進行核酸提取。核酸提取試劑應(yīng)使用批準的、產(chǎn)品說明書中的核酸提取試劑盒,病毒RNA先需要轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄為cDNA,再進行擴張檢測。PCR檢測應(yīng)使用批準產(chǎn)品說明書中的熒光定量PCR儀,通過熒光定量PCR所得到的樣本CT值的大小,可以判斷患者樣本中是否含有的病毒。