PEI轉(zhuǎn)染試劑其原理是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后，再與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，通過細(xì)胞胞吞進(jìn)入細(xì)胞。該產(chǎn)品具有轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低，操作簡單，重復(fù)性好，適用范圍廣等特點(diǎn)。
1、接種細(xì)胞：
對于貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染前18-24 h進(jìn)行鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時(shí)的密度大約在80%左右。對于懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板，每500 µL生長培養(yǎng)基中加入4~8×105cells。
2、準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物：
a、對于每孔細(xì)胞，將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基），混勻。
b、對于每孔細(xì)胞，將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基），輕輕混勻。
注：無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液，不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因?yàn)镋Z Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。
c、將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，輕輕混勻。
d、室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。
3、轉(zhuǎn)染細(xì)胞：
a、將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。
b、在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液，更換新的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至對轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析。
員_a.png)