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技術(shù)文章首頁(yè) > 技術(shù)文章 核酸提取純化原則要求及效率影響因素分析
  • 核酸提取純化原則要求及效率影響因素分析
  • 點(diǎn)擊次數(shù):4024 更新時(shí)間:2020-09-16
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  •   核酸中因?yàn)猷堰蕢A和嘧啶堿具有共軛雙鍵,所以核酸具有紫外吸收的特性,DNA鈉鹽的紫外吸收在260nm附近,其吸光率以A260表示,在230nm處于吸收低谷,因此可以使用紫外分光光度計(jì)對(duì)核酸進(jìn)行定量及定性測(cè)定。
     
      全自動(dòng)核酸提取因其具有快速高效、簡(jiǎn)單易用以及安全無(wú)毒等特點(diǎn)迅速得到推廣應(yīng)用,成為實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)配。
     
      核酸提取純化原則和要求
     
      1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性;
     
      2、排除其它分子的污染(如提取DNA時(shí)排除RNA的干擾);
     
      3、核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和高濃度的金屬離子;
     
      4、盡可能降低蛋白質(zhì)、多糖和脂類等大分子物質(zhì);
     
      核酸提取純化方法:
     
      1、熱裂解堿法
     
      堿法提取主要是利用共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線性染色質(zhì)在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來(lái)分離他們,在堿性下,變性蛋白是可溶的。
     
      2、煮沸裂解法
     
      加熱處理DNA溶液,利用線性DNA分子的特性,通過(guò)離心將DNA段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片形成的沉淀分離。
     
      3、納米磁珠法
     
      運(yùn)用納米技術(shù)對(duì)超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾后,制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識(shí)別和高效結(jié)合。利用氧化硅納米微球的超順磁性,在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場(chǎng)的作用下,從血液、動(dòng)物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA。
     
      4、酚/抽提法
     
      1956年發(fā)明,通過(guò)酚/處理細(xì)胞破碎液或者組織勻漿后,在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分,在有機(jī)相中主要是脂類物質(zhì),蛋白質(zhì)位于兩相之間。
     
      5、醇沉淀法
     
      乙醇能夠消除核酸的水化層,使帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)暴露出來(lái),NA﹢等帶正電荷離子能與磷酸基團(tuán)結(jié)合,形成沉淀。
     
      6、層析柱法
     
      通過(guò)特殊硅基質(zhì)吸附材料,能夠特定吸附DNA,而RNA和蛋白質(zhì)順利通過(guò),然后利用高鹽低PH結(jié)合核酸,低鹽高PH值洗脫,來(lái)分離純化核酸。
     
      7、其他方法
     
      除了上述常用的方法之外,還有超聲法、反復(fù)凍融法、酶解法及低滲裂解等等多種方法。
     
      提取效率影響因素
     
      磁珠提取由裂解、洗滌和洗脫等步驟組成,影響這些步驟的因素同樣也會(huì)影響磁珠的提取效率。
     
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