lip3000脂質體3000是一種人工膜。在水中磷脂分子親水頭部插入水中,脂質體疏水尾部伸向空氣,攪動后形成雙層脂分子的球形脂質體,直徑25~1000nm不等。脂質體可用于轉基因,或制備的藥物,利用脂質體可以和細胞膜融合的特點,將藥物送入細胞內部生物學定義:當兩性分子如磷脂和鞘脂分散于水相時,分子的疏水尾部傾向于聚集在一起,避開水相,而親水頭部暴露在水相,形成具有雙分子層結構的的封閉囊泡,稱為脂質體。藥劑學定義脂質體(liposome):系指將藥物包封于類脂質雙分子層內而形成的微型泡囊體。
使用試劑,您可以獲得:
1、在多種細胞系中具有*地轉染效率和較高水平地重組蛋白表達。
2、傳輸siRNA的優(yōu)異性能。
3、在有血清存在的情況下可保證轉染效力——轉染后無需更換培養(yǎng)基。
4、保證可以用于高通量應用的試劑。
5、用于建立穩(wěn)定細胞系的可靠試劑lip3000脂質體3000試劑為大多數(shù)細胞提供了zui高的轉染效率和活性。當存在血清或用于進行蛋白表達的細胞系(如COS-7,CHO和293)時,
lip3000脂質體3000尤為有效,效率可超過90%。
注意事項:
要求細胞鋪板密度較高,以90%-95%為佳,這有助于減少陽離子脂質體細胞毒性造成的影響??捎糜谟醒迮囵B(yǎng)基的轉染,并且轉染前后不需要換培養(yǎng)基,使得操作方便了許多,但是要注意制備轉染復合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉染試劑,因為血清會影響復合物的形成。
復合物形成后是可以加入血清。這里要特別注意檢測所用的無血清培養(yǎng)基是否能和lip3000脂質體3000匹配,比如已知CD293,SFMII,VP-SFM就不行。此外還應該留意,如果研究的基因要求比較長的表達時間,比如細胞周期相關基因,或者時細胞表面蛋白,選擇細胞鋪板密較低的轉染試劑,不適合用lip3000脂質體3000。
對于大多數(shù)陽離子脂質體試劑,應優(yōu)化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到zui大的轉染效率。DNA和轉染試劑的比例,通常推薦是1:2或者1:3,優(yōu)化可以從0.5-5之間慢慢試。使用小劑量確定的優(yōu)化條件可以用于進行大劑量的轉染,只要根據培養(yǎng)板表面比例線性增加鋪板細胞的數(shù)目、陽離子脂質體試劑和DNA量就可以了。
還有轉染的時候培養(yǎng)基中不能添加抗生素??股兀热缜嗝顾睾玩溍顾?,一般對于真核細胞無毒,但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,使抗生素可以進入細胞。這降低了細胞的活性,導致轉染效率低。所以,在轉染培養(yǎng)基中不能使用抗生素,甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用抗生素。這樣,在轉染前就不必潤洗細胞。對于穩(wěn)定轉染,不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,因為這些抗生素是GENETICIN選擇性抗生素的競爭性抑制劑。另外,為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長,使用比含血清培養(yǎng)基更少的抗生素量。
陽離子脂質體應該在4度保存,要注意避免多次反復長時間開蓋,因為可能會導致脂質體氧化而影響轉染效率。當然還有要注意質粒的質量,質粒的內毒素是轉染的大敵。