轉(zhuǎn)染試劑是一種多聚陽離子聚合物，具有較高的陽離子電荷密度使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體。這種聚陽離子能將各種報(bào)告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細(xì)胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺，經(jīng)進(jìn)一步的改性后，其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細(xì)胞毒性低。
所列步驟適用于24孔板培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，其他培養(yǎng)材料，請參考表1按照轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按孔計(jì)算。大部分細(xì)胞系所使用的DNA(μg)與VigeneFection(μg)的比值為1:3或1:4，轉(zhuǎn)染狀態(tài)良好的細(xì)胞可獲得高轉(zhuǎn)染效率、高表達(dá)水平和低細(xì)胞毒性。
1、貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天每孔0.5-2×105個(gè)細(xì)胞接種于500μl培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞可長至90-95%融合；懸浮細(xì)胞：在配制轉(zhuǎn)染液前每孔4-8×105個(gè)細(xì)胞接種于500μl培養(yǎng)基中。
2、轉(zhuǎn)染液制備，每孔細(xì)胞用量如下：
A、用50μlDMEM培養(yǎng)基稀釋質(zhì)粒DNA，輕輕混勻。
B、取適量VigeneFection在50μlDMEM培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育5min。
C、將前兩步所稀釋的DNA和VigeneFection混合，輕輕混勻，室溫放置30min。
3、在每孔細(xì)胞中加入混合后的轉(zhuǎn)染液，輕輕搖勻。
4、貼壁細(xì)胞可在轉(zhuǎn)染4-6h后可更換培養(yǎng)基，懸浮細(xì)胞可在轉(zhuǎn)染后的18-48h之間，對細(xì)胞進(jìn)行換液。轉(zhuǎn)染18-48h之后可檢測基因表達(dá)。如果檢測到蛋白表達(dá)，請?jiān)谵D(zhuǎn)染后24-72h收集培養(yǎng)液。
5、對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染24h后以1:10傳代培養(yǎng)，第二天可加入選擇培養(yǎng)基。
轉(zhuǎn)染試劑注意事項(xiàng)：
推薦在混合前使用Opti-MEM（Cat.No.267485)或DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基(Cat.No.SH30022.01B)稀釋VigeneFection和核酸。
轉(zhuǎn)染過程中勿向培養(yǎng)基中添加抗生素，以免造成細(xì)胞死亡。
不同批次實(shí)驗(yàn)請保持細(xì)胞接種條件相同。
轉(zhuǎn)染前細(xì)胞的狀態(tài)好壞對終的轉(zhuǎn)染效果高低影響很大，請務(wù)必保證轉(zhuǎn)染前，細(xì)胞處于良好的生長狀態(tài)。
